程浩 外周血抗凝剂,选EDTA or 肝素? 外周血是我们 流式实验 中常用到的样本之一。由于血液离体后会在凝血因子的作用下凝固(图1),采集外周血样本时,需要使用带抗凝剂的采血管,或采集后立即加入抗凝剂。通常,我们流式实验中用到的抗凝剂有两种: EDTA和肝素 。 图1:凝血(左)与抗凝(右)效果展示 1 两种抗凝剂的抗凝原理 EDTA(乙二胺四乙酸): EDTA能与血液中的Ca 2+ 螯合,使Ca 2+ 失去凝血作用,阻止血液凝固。常用的... 样本制备指南 2022-09-15
程浩 裂红or分离液?外周血不同制备方法应用场景 外周血样本采集完毕后,我们需要对其中的待测单细胞进行提取。针对外周血样本,最常使用的样本制备方法有两种: 一. 裂红法 利用红细胞裂解液,去除红细胞 二. Ficoll法 利用不同细胞的沉降系数差异,进行梯度密度离心,提取PBMC 两种方法分别在什么场景下应用?接着往下看。 裂红法 裂红法,即裂解样本中的红细胞。血液中的红细胞比白细胞多10-100倍,红细胞数量过多,会影响细胞群体的分析。因此,我... 样本制备指南 2022-09-15
程浩 易被忽略的CD4、CD8共表达细胞-胸腺淋巴细胞 做过流式实验的同学,对CD4、CD8这两个指标都不会陌生。检测CD4+ T细胞和CD8+ T细胞分型,是 流式 中最常见的实验之一。 通常,我们会先检测CD3,来圈总T淋巴细胞,再分别用CD4抗体和CD8抗体,来区分CD4+ T淋巴细胞(辅助或调节性T细胞)和CD8+ T淋巴细胞(细胞毒性T细胞)。 新生小鼠脾脏细胞 上图为新生小鼠脾脏细胞进行的CD3-PE、CD4-FITC、CD8-APC三色流... 流式课堂 2022-09-15
程浩 流式实验对照设置之FMO 往期文章中,已讲解了 单阳对照 和 同型对照 的作用。可以先回顾和总结一下, 流式对照的设计和用途: 实验分组 作用 阴性/空白对照 调节仪器电压 单染/单阳对照 调节补偿 同型对照 消除背景染色 FMO对照 保证设门的准确性 生物学对照 实验结果对比 实验组 实验结果 大部分老师做流式实验时,会用到空白对照、单阳对照、同型对照、生物学对照等,用到FMO对照的比较少。尽管如此,FMO对照在设置圈门... 流式课堂 2022-09-15
程浩 常见免疫流式配色及实验操作步骤-2022.09 Panel Design and Experimental Steps of Common Immune Cells by Flow Cytometer-2022.09.pdf... 宣传资料 画册 2022-09-07
程浩 流式实验该准备多少管样本?如何设置对照? 实验过程中,老师们或许会有疑问:一个完整的 流式实验 中,到底需要几种对照,需要准备多少管样本来设置对照呢? 下面,我们为大家总结 6种常见的流式对照设置,并以CD3-APC、CD4-FITC、CD8-PE三色实验为示例 ,为大家提供样本管设置参考。 01 空白对照——用于调节仪器电压 空白对照,即不添加任何荧光染料的对照管。 设置空白对照,是为了区分细胞本底的自发荧光,及判断药物处理等外界因素是... 流式课堂 2022-06-27
程浩 细胞内靶标染色步骤 视频简介: 本视频为 Elabscience ® 公司细胞内靶标流式实验的操作流程;展示了 Fc 受体封闭、表面指标抗体孵育、固定破膜、胞内指标抗体孵育等步骤;为实验者提供胞内指标流式实验操作方面的指导。 实验步骤: 样本制备→细胞计数→实验对照设置→ Fc 受体封闭(选做)→表面指标抗体孵育→固定破膜→胞内指标抗体孵育→上机检测... 实验操作视频 流式抗体 2022-06-20
程浩 细胞表面靶标染色步骤 视频简介: 本视频为 Elabscience ® 公司细胞表面指标流式实验的操作流程;展示了 Fc 受体封闭、实验对照设置、抗体孵育等步骤;为流式实验提供相应的指导。 实验步骤: 样本制备→细胞计数→实验对照设置→ Fc 受体封闭(选做)→抗体孵育→上机检测... 实验操作视频 流式抗体 2022-06-20
程浩 小鼠肿瘤样本单细胞悬液的制备及注意事项 小鼠肿瘤样本制备 1. 颈椎脱臼法将荷瘤小鼠处死,75%酒精浸泡5 min,取出小鼠置于无菌操作台上。 2. 左手持镊子,右手持弯剪,沿肿瘤边缘剪下长约1cm的口子,可清晰看见肿瘤附着于皮下,沿肿瘤边缘轻轻剪开连接处,剥离肿瘤。 3. 将剥离的肿瘤放入100 mm的培养皿中,并在室温下加入5~10 mL的1640基础培养基。 单细胞悬液的制备 A.混合酶消化法 1. 待所有肿瘤剥离完毕后,将肿瘤转... 样本制备指南 2022-06-07
程浩 小鼠胸腺单细胞悬液制备流程及注意事项 小鼠胸腺单细胞悬液制备流程 1 . 用颈椎脱臼法处死小鼠,75%酒精浸泡5 min后,取出小鼠置于无菌操作台上,腹部朝上。 2. 小鼠胸骨下方剪开小鼠的胸腔,可看到白色透明胸腺,呈两叶分布,位于两肺的前方,胸骨的正后方。 3. 取出胸腺并浸泡于干净的PBS溶液中。 4. 将胸腺置于200目筛网中,用组织研磨棒轻轻研磨至没有明显块状物。 5. 用15 mL PBS冲洗筛网,并将冲洗液收集于15 mL... 样本制备指南 2022-06-07
程浩 小鼠外周血单细胞悬液制备流程及注意事项 小鼠外周血单细胞悬液制备 1. 采集小鼠外周血样本于抗凝管中。 2. 离心管内加入100 μL新鲜血,加入1 Test对应流式抗体,混匀,4℃避光孵育30 min。 3. 加入2 mL 1×红细胞裂解液,混匀,4℃裂解5 min。 4. 300 g离心5 min(裂解完立即离心,防止时间过长损伤细胞),弃上清可得到白色的细胞沉淀。 5. PBS洗涤一遍。 6. 加入200 μL细胞染色缓冲液重悬细... 样本制备指南 2022-06-07