易被忽略的CD4、CD8共表达细胞-胸腺淋巴细胞
在成熟的T淋巴细胞中,CD4和CD8是互斥的两个指标,通常情况下,二者不共表达,然而有一类CD4、CD8共表达的细胞,却常常被流式新手忽略——胸腺淋巴细胞。本文简要介绍了胸腺淋巴细胞的检测方案,利用CD4及CD8共表达进行检测,帮助加深对T淋巴细胞的了解。

做过流式实验的同学,对CD4、CD8这两个指标都不会陌生。检测CD4+ T细胞和CD8+ T细胞分型,是流式中最常见的实验之一。

通常,我们会先检测CD3,来圈总T淋巴细胞,再分别用CD4抗体和CD8抗体,来区分CD4+ T淋巴细胞(辅助或调节性T细胞)和CD8+ T淋巴细胞(细胞毒性T细胞)。

  新生小鼠脾脏细胞

                新生小鼠脾脏细胞

上图为新生小鼠脾脏细胞进行的CD3-PE、CD4-FITC、CD8-APC三色流式实验结果。从图中可以看出,在新生小鼠脾脏中,绝大部分细胞是不共表达的单阳细胞,其中约2/3为CD4+CD8-细胞,1/3为CD4-CD8+细胞。

在成熟的T淋巴细胞中,CD4和CD8是互斥的两个指标,因此,在前期配色、后期调节补偿和数据分析的时候,都不太容易出错。通常情况下,二者不共表达,然而有一类CD4、CD8共表达的细胞,却常常被流式新手忽略——胸腺淋巴细胞

胸腺是T细胞分化、发育、成熟的场所。胸腺细胞是处于不同分化阶段的T细胞。在骨髓中分化出的淋巴细胞样祖细胞,经过血液循环进入到胸腺,在胸腺中完成T细胞的发育,成为成熟T细胞,然后再次随着血液循环,进入到外周淋巴器官。

 胸腺淋巴细胞

                                                           (图片来源于《医学免疫学》)


T细胞的发育,会经历淋巴样祖细胞→祖T细胞→前T细胞→未成熟T细胞→成熟T细胞等阶段,不同阶段的T细胞所表达的抗原不同。根据CD4和CD8的表达来分类,胸腺中的T细胞又可以分为双阴性细胞(DN细胞,double negative cell),双阳性细胞(DP细胞,double positive cell)及单阳性细胞(SP细胞,single positive cell)。

1 前T细胞及之前的阶段都是DN细胞,既不表达CD4也不表达CD8。经过诱导之后,前T细胞快速增殖,开始表达CD4和CD8。

2 此后,细胞进入DP细胞阶段。此时,细胞共表达CD4和CD8,并停止增殖。

3 未成熟T细胞经过阳性选择,进一步分化成SP细胞,即CD4+单阳性细胞或CD8+单阳性细胞。其中,约2/3分化成CD4+细胞,1/3分化成CD8+细胞,在这个过程中,95%的细胞会发生凋亡。

4 经过阴性选择后,SP细胞成为成熟T细胞,通过血液循环进入外周免疫器官。

新生小鼠胸腺细胞

        图二. 新生小鼠胸腺细胞

上图为新生小鼠胸腺CD4-FITC、CD8-APC的流式实验结果。从图中可以看出,在新生小鼠胸腺中,绝大部分细胞共表达CD4和CD8。


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