外周血是我们流式实验中常用到的样本之一。由于血液离体后会在凝血因子的作用下凝固(图1),采集外周血样本时,需要使用带抗凝剂的采血管,或采集后立即加入抗凝剂。通常,我们流式实验中用到的抗凝剂有两种:EDTA和肝素。
图1:凝血(左)与抗凝(右)效果展示
1 两种抗凝剂的抗凝原理
EDTA(乙二胺四乙酸):
EDTA能与血液中的Ca2+螯合,使Ca2+失去凝血作用,阻止血液凝固。常用的是钠盐或钾盐。
肝素:
加强抗凝血酶(AT)灭活丝氨酸蛋白酶的作用,阻止凝血酶的形成和血小板的聚集,从而阻止血液凝固。
2 两种抗凝剂的特点
EDTA
钾盐在血液中的溶解性更好,因而使用较多,尤其是二钾盐——EDTA-K2可以通过喷雾干燥法附着在采血管的内表面,不会对采集的血液样品产生稀释。
EDTA对血细胞形态的影响比较小,有较好的稳定性,但EDTA会抑制或干扰纤维蛋白凝块形成时纤维蛋白单体的聚合,不适于血凝和血小板功能的检测,也不适用于钙、钾、钠及含氮物质的测定。
肝素
肝素螯合力低,对水分子运动的影响小,对血液成分的干扰少,不影响红细胞体积,不引起溶血,可谓优点众多。但肝素也有两个明显缺点:
● 肝素主要从猪牛羊等动物组织中分离得到,相比其他抗凝剂的成本更高;
● 肝素只能延缓凝血过程而不能阻止凝血。实际使用中发现,使用肝素钠作为抗凝剂的全血,在常温10~12小时,会逐渐出现凝血结块的现象。
3 EDTA or 肝素
由于两种抗凝剂会对血液产生不同的干扰,我们通常会根据实验目的来选择合适的抗凝剂。
a 若样本直接裂解红细胞,进行表面指标染色实验,则两种抗凝剂都可使用;
b 因为肝素会对血小板产生影响,所有血小板相关实验不建议使用肝素;
c 如果是采血后检测细胞因子,则不建议使用EDTA抗凝。
图2:EDTA(左)与肝素(右)抗凝检测细胞因子IFN-γ结果
从图中结果可以看出,使用两种抗凝剂抗凝后,检测细胞因子,EDTA抗凝样本的IFN-γ表达量明显低于肝素抗凝样本。
由于EDTA能与Ca2+螯合,导致细胞因子刺激剂——离子霉素(Ionomycin)转运的Ca2+减少,而Ca2+又是细胞因子分泌必不可少的物质,因此,进行细胞因子检测,建议使用肝素抗凝。
**不论使用哪种抗凝剂,采血后一定要让抗凝剂与血液充分混合,才能达到抗凝的效果。
以上就是抗凝剂EDTA和肝素的相关介绍。如有其他实验相关问题,欢迎咨询网站右侧的在线客服~