程浩 常见流式样本的保存方法及注意事项 流式细胞术 在细胞计数、细胞抗原检测、细胞功能检测、细胞核酸性能分析等实验中发挥着重要作用,相比其他检测方法,具有目标精准、指标量化、节约样本、高通量等检测优势。 流式样本制备及保存作为流式细胞术至关重要的一环,对实验的成败有着举足轻重的作用,下面我们将 流式细胞术中常见的样本保存方法和注意事项 做一个汇总。 首先,流式细胞术常见的样本有以下几种 : 分类 特征 流体样本 骨髓、外周血、体液(胸水... 样本制备指南 2023-06-27
程浩 流式实验中常见组织样本单细胞悬液制备方案 众所周知,好的样本制备是实验成功的一半。单细胞是流式细胞术对细胞进行分析检测的前提条件。因此,在进行流式实验时,制备出合格、分散的单细胞悬液是流式细胞术样本制备技术中重要的一环,它既要求组织分散成为单个细胞,又要维持细胞的固有属性及生物学特性。今天,给大家列举几个常见流式组织样本单细胞悬液制备方案,助力 流式实验 。 脾脏 脾脏单细胞悬液制备操作步骤: 1 取出小鼠脾脏,并浸泡于干净的PBS溶液中... 样本制备指南 2023-04-25
程浩 组织单细胞悬液制备中各种酶的特性及应用场景 组织由细胞和细胞外基质(ECM)有序而紧密地联结在一起。从组织中获取单细胞悬液,应用于流式检测、单细胞测序、体外培养、药物筛选、细胞移植、类器官培养以及肿瘤研究等方面,更接近体内的天然状态,具有很多优势。 要想获得高品质的单细胞悬液,需要采取一些有效措施,其中, 酶消化法 就是一种既能维持细胞的最佳状态、又能有效地获得单个细胞的方法。 消化组织的酶多种多样,常见的消化酶主要有以下几种。根据消化原理... 样本制备指南 2023-02-02
程浩 外周血抗凝剂,选EDTA or 肝素? 外周血是我们 流式实验 中常用到的样本之一。由于血液离体后会在凝血因子的作用下凝固(图1),采集外周血样本时,需要使用带抗凝剂的采血管,或采集后立即加入抗凝剂。通常,我们流式实验中用到的抗凝剂有两种: EDTA和肝素 。 图1:凝血(左)与抗凝(右)效果展示 1 两种抗凝剂的抗凝原理 EDTA(乙二胺四乙酸): EDTA能与血液中的Ca 2+ 螯合,使Ca 2+ 失去凝血作用,阻止血液凝固。常用的... 样本制备指南 2022-09-15
程浩 裂红or分离液?外周血不同制备方法应用场景 外周血样本采集完毕后,我们需要对其中的待测单细胞进行提取。针对外周血样本,最常使用的样本制备方法有两种: 一. 裂红法 利用红细胞裂解液,去除红细胞 二. Ficoll法 利用不同细胞的沉降系数差异,进行梯度密度离心,提取PBMC 两种方法分别在什么场景下应用?接着往下看。 裂红法 裂红法,即裂解样本中的红细胞。血液中的红细胞比白细胞多10-100倍,红细胞数量过多,会影响细胞群体的分析。因此,我... 样本制备指南 2022-09-15
程浩 小鼠肿瘤样本单细胞悬液的制备及注意事项 小鼠肿瘤样本制备 1. 颈椎脱臼法将荷瘤小鼠处死,75%酒精浸泡5 min,取出小鼠置于无菌操作台上。 2. 左手持镊子,右手持弯剪,沿肿瘤边缘剪下长约1cm的口子,可清晰看见肿瘤附着于皮下,沿肿瘤边缘轻轻剪开连接处,剥离肿瘤。 3. 将剥离的肿瘤放入100 mm的培养皿中,并在室温下加入5~10 mL的1640基础培养基。 单细胞悬液的制备 A.混合酶消化法 1. 待所有肿瘤剥离完毕后,将肿瘤转... 样本制备指南 2022-06-07
程浩 小鼠胸腺单细胞悬液制备流程及注意事项 小鼠胸腺单细胞悬液制备流程 1 . 用颈椎脱臼法处死小鼠,75%酒精浸泡5 min后,取出小鼠置于无菌操作台上,腹部朝上。 2. 小鼠胸骨下方剪开小鼠的胸腔,可看到白色透明胸腺,呈两叶分布,位于两肺的前方,胸骨的正后方。 3. 取出胸腺并浸泡于干净的PBS溶液中。 4. 将胸腺置于200目筛网中,用组织研磨棒轻轻研磨至没有明显块状物。 5. 用15 mL PBS冲洗筛网,并将冲洗液收集于15 mL... 样本制备指南 2022-06-07
程浩 小鼠外周血单细胞悬液制备流程及注意事项 小鼠外周血单细胞悬液制备 1. 采集小鼠外周血样本于抗凝管中。 2. 离心管内加入100 μL新鲜血,加入1 Test对应流式抗体,混匀,4℃避光孵育30 min。 3. 加入2 mL 1×红细胞裂解液,混匀,4℃裂解5 min。 4. 300 g离心5 min(裂解完立即离心,防止时间过长损伤细胞),弃上清可得到白色的细胞沉淀。 5. PBS洗涤一遍。 6. 加入200 μL细胞染色缓冲液重悬细... 样本制备指南 2022-06-07
程浩 小鼠脾脏单细胞悬液制备流程及注意事项 小鼠脾脏单细胞悬液制备流程 a) 研磨法 1. 小鼠颈椎脱臼处死,置于75%酒精浸泡5 min后,取出小鼠,置于无菌操作台上,左腹侧朝上。 2. 小鼠左腹侧中部剪开小口,撕开皮肤,暴露腹壁,可见红色长条状脾脏。 3. 脾脏下侧提起腹膜,剪开后上翻,暴露出脾脏。用镊子提起脾脏,眼科剪分离脾脏下面的结缔组织,取出脾脏,并浸泡于干净的PBS溶液中。 4. 将脾脏置于200目筛网中,用组织研磨棒轻轻研磨至... 样本制备指南 2022-06-07
程浩 小鼠淋巴结单细胞悬液制备及注意事项 小鼠淋巴结单细胞悬液制备流程 1. 将小鼠颈椎脱臼处死,75%酒精浸泡5 min,取出小鼠,腹部朝上置于无菌操作台上。 2. 用剪子从胸骨起沿正中线一直到颌下将皮肤剪开,再从颌下向左右耳根的方向切开皮肤。用镊子夹着皮肤向左右掀开并用针固定,即可见到胸骨上方的一对体积较大的颌下腺。在左右颌下腺各自的上缘,附着有黄色的颈前部淋巴结。剪断胸锁乳突肌和肌腹,并掀起它们两个断端,可见到左颌下腺背侧深部左、右... 样本制备指南 2022-06-07
程浩 小鼠骨髓单细胞悬液制备流程及注意事项 小鼠骨髓单细胞悬液制备流程 1. 颈椎脱臼法处死小鼠,放在75%酒精中浸泡5 min。提前于超净台上准备一个消毒托盘(可用无菌口罩或者用浸满酒精的纱布代替),取出小鼠并铺于消毒托盘上。 2. 在无菌环境下取小鼠的后肢骨。用眼科镊小心捏起小鼠两髋关节之间的腹部皮肤,用眼科剪小心剪开,并分离两下肢的皮肤。将皮肤往下在脚踝处剪断,往上在髋关节处剪断,游离出小鼠的两条后肢。 3. 小心剥离肌肉(肌肉两端的... 样本制备指南 2022-06-07
程浩 小鼠腹水及单细胞悬液制备及注意事项 小鼠腹水及单细胞悬液制备流程 1. 配制6%淀粉肉汤 。 6%淀粉肉汤配制方法:牛肉膏 0.3 g、蛋白胨 1.0 g、氯化钠 0.5 g、蒸馏水 100 mL,上述材料混合加热后加入可溶性淀粉6.0 g;溶解后,121℃高压灭菌15~20 min,EP管分装封口,将肉汤放置于4℃保存。 2. 小鼠腹腔注射1 mL 6%淀粉肉汤(注意避开肠管和内脏),刺激60~72 h。 3. 颈椎脱臼法处死小鼠... 样本制备指南 2022-06-07