程浩 常见流式样本的保存方法及注意事项 流式细胞术 在细胞计数、细胞抗原检测、细胞功能检测、细胞核酸性能分析等实验中发挥着重要作用，相比其他检测方法，具有目标精准、指标量化、节约样本、高通量等检测优势。 流式样本制备及保存作为流式细胞术至关重要的一环，对实验的成败有着举足轻重的作用，下面我们将 流式细胞术中常见的样本保存方法和注意事项 做一个汇总。 首先，流式细胞术常见的样本有以下几种 ： 分类 特征 流体样本 骨髓、外周血、体液（胸水... 样本制备指南 2023-06-27
程浩 流式实验中常见组织样本单细胞悬液制备方案 众所周知，好的样本制备是实验成功的一半。单细胞是流式细胞术对细胞进行分析检测的前提条件。因此，在进行流式实验时，制备出合格、分散的单细胞悬液是流式细胞术样本制备技术中重要的一环，它既要求组织分散成为单个细胞，又要维持细胞的固有属性及生物学特性。今天，给大家列举几个常见流式组织样本单细胞悬液制备方案，助力 流式实验 。 脾脏 脾脏单细胞悬液制备操作步骤： 1 取出小鼠脾脏，并浸泡于干净的PBS溶液中... 样本制备指南 2023-04-25
程浩 组织单细胞悬液制备中各种酶的特性及应用场景 组织由细胞和细胞外基质（ECM）有序而紧密地联结在一起。从组织中获取单细胞悬液，应用于流式检测、单细胞测序、体外培养、药物筛选、细胞移植、类器官培养以及肿瘤研究等方面，更接近体内的天然状态，具有很多优势。 要想获得高品质的单细胞悬液，需要采取一些有效措施，其中， 酶消化法 就是一种既能维持细胞的最佳状态、又能有效地获得单个细胞的方法。 消化组织的酶多种多样，常见的消化酶主要有以下几种。根据消化原理... 样本制备指南 2023-02-02
程浩 外周血抗凝剂，选EDTA or 肝素？ 外周血是我们 流式实验 中常用到的样本之一。由于血液离体后会在凝血因子的作用下凝固（图1），采集外周血样本时，需要使用带抗凝剂的采血管，或采集后立即加入抗凝剂。通常，我们流式实验中用到的抗凝剂有两种： EDTA和肝素 。 图1：凝血（左）与抗凝（右）效果展示 1 两种抗凝剂的抗凝原理 EDTA（乙二胺四乙酸）： EDTA能与血液中的Ca 2＋ 螯合，使Ca 2＋ 失去凝血作用，阻止血液凝固。常用的... 样本制备指南 2022-09-15
程浩 裂红or分离液？外周血不同制备方法应用场景 外周血样本采集完毕后，我们需要对其中的待测单细胞进行提取。针对外周血样本，最常使用的样本制备方法有两种： 一. 裂红法 利用红细胞裂解液，去除红细胞 二. Ficoll法 利用不同细胞的沉降系数差异，进行梯度密度离心，提取PBMC 两种方法分别在什么场景下应用？接着往下看。 裂红法 裂红法，即裂解样本中的红细胞。血液中的红细胞比白细胞多10-100倍，红细胞数量过多，会影响细胞群体的分析。因此，我... 样本制备指南 2022-09-15
程浩 小鼠肿瘤样本单细胞悬液的制备及注意事项 小鼠肿瘤样本制备 1. 颈椎脱臼法将荷瘤小鼠处死，75%酒精浸泡5 min，取出小鼠置于无菌操作台上。 2. 左手持镊子，右手持弯剪，沿肿瘤边缘剪下长约1cm的口子，可清晰看见肿瘤附着于皮下，沿肿瘤边缘轻轻剪开连接处，剥离肿瘤。 3. 将剥离的肿瘤放入100 mm的培养皿中，并在室温下加入5~10 mL的1640基础培养基。 单细胞悬液的制备 A.混合酶消化法 1. 待所有肿瘤剥离完毕后，将肿瘤转... 样本制备指南 2022-06-07
程浩 小鼠胸腺单细胞悬液制备流程及注意事项 小鼠胸腺单细胞悬液制备流程 1 . 用颈椎脱臼法处死小鼠，75%酒精浸泡5 min后，取出小鼠置于无菌操作台上，腹部朝上。 2. 小鼠胸骨下方剪开小鼠的胸腔，可看到白色透明胸腺，呈两叶分布，位于两肺的前方，胸骨的正后方。 3. 取出胸腺并浸泡于干净的PBS溶液中。 4. 将胸腺置于200目筛网中，用组织研磨棒轻轻研磨至没有明显块状物。 5. 用15 mL PBS冲洗筛网，并将冲洗液收集于15 mL... 样本制备指南 2022-06-07
程浩 小鼠外周血单细胞悬液制备流程及注意事项 小鼠外周血单细胞悬液制备 1. 采集小鼠外周血样本于抗凝管中。 2. 离心管内加入100 μL新鲜血，加入1 Test对应流式抗体，混匀，4℃避光孵育30 min。 3. 加入2 mL 1×红细胞裂解液，混匀，4℃裂解5 min。 4. 300 g离心5 min（裂解完立即离心，防止时间过长损伤细胞），弃上清可得到白色的细胞沉淀。 5. PBS洗涤一遍。 6. 加入200 μL细胞染色缓冲液重悬细... 样本制备指南 2022-06-07
程浩 小鼠脾脏单细胞悬液制备流程及注意事项 小鼠脾脏单细胞悬液制备流程 a) 研磨法 1. 小鼠颈椎脱臼处死，置于75%酒精浸泡5 min后，取出小鼠，置于无菌操作台上，左腹侧朝上。 2. 小鼠左腹侧中部剪开小口，撕开皮肤，暴露腹壁，可见红色长条状脾脏。 3. 脾脏下侧提起腹膜，剪开后上翻，暴露出脾脏。用镊子提起脾脏，眼科剪分离脾脏下面的结缔组织，取出脾脏，并浸泡于干净的PBS溶液中。 4. 将脾脏置于200目筛网中，用组织研磨棒轻轻研磨至... 样本制备指南 2022-06-07
程浩 小鼠淋巴结单细胞悬液制备及注意事项 小鼠淋巴结单细胞悬液制备流程 1. 将小鼠颈椎脱臼处死，75%酒精浸泡5 min，取出小鼠，腹部朝上置于无菌操作台上。 2. 用剪子从胸骨起沿正中线一直到颌下将皮肤剪开，再从颌下向左右耳根的方向切开皮肤。用镊子夹着皮肤向左右掀开并用针固定，即可见到胸骨上方的一对体积较大的颌下腺。在左右颌下腺各自的上缘，附着有黄色的颈前部淋巴结。剪断胸锁乳突肌和肌腹，并掀起它们两个断端，可见到左颌下腺背侧深部左、右... 样本制备指南 2022-06-07
程浩 小鼠骨髓单细胞悬液制备流程及注意事项 小鼠骨髓单细胞悬液制备流程 1. 颈椎脱臼法处死小鼠，放在75%酒精中浸泡5 min。提前于超净台上准备一个消毒托盘（可用无菌口罩或者用浸满酒精的纱布代替），取出小鼠并铺于消毒托盘上。 2. 在无菌环境下取小鼠的后肢骨。用眼科镊小心捏起小鼠两髋关节之间的腹部皮肤，用眼科剪小心剪开，并分离两下肢的皮肤。将皮肤往下在脚踝处剪断，往上在髋关节处剪断，游离出小鼠的两条后肢。 3. 小心剥离肌肉（肌肉两端的... 样本制备指南 2022-06-07
程浩 小鼠腹水及单细胞悬液制备及注意事项 小鼠腹水及单细胞悬液制备流程 1. 配制6%淀粉肉汤 。 6%淀粉肉汤配制方法：牛肉膏 0.3 g、蛋白胨 1.0 g、氯化钠 0.5 g、蒸馏水 100 mL，上述材料混合加热后加入可溶性淀粉6.0 g；溶解后，121℃高压灭菌15~20 min，EP管分装封口，将肉汤放置于4℃保存。 2. 小鼠腹腔注射1 mL 6%淀粉肉汤（注意避开肠管和内脏），刺激60~72 h。 3. 颈椎脱臼法处死小鼠... 样本制备指南 2022-06-07