免疫沉淀和免疫共沉淀，是许多蛋白质组学研究的重要步骤，用于检测蛋白质是否存在于样本中、测定蛋白的分子大小和相对丰度、确定蛋白丰度的上调和下调是否有效，及研究蛋白的稳定性、翻译后修饰、蛋白的相互作用等。免疫沉淀常和其它检测实验串联进行，如：IP-ELISA、IP-WB、IP-MS等。
免疫沉淀
免疫沉淀（IP）的原理，是将抗体与固相载体结合后，利用抗原抗体的特异性反应，从纯化混合物中富集目的蛋白的一种方法。目前最常用的固相载体是免疫磁珠和亲和凝胶。
免疫磁珠可以通过磁性吸附，快速精准地将抗原抗体复合物从混合体系分离出来，还能搭配自动化高通量检测仪使用；
亲和凝胶通过离心分离目的蛋白。凝胶具有更大的粒径和更高的抗体载量，因此也具有更强的吸附能力，在靶蛋白丰度较低时，能很好地富集到目的蛋白。
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值得注意的是，如果靶蛋白是重组表达的，并且设计了相应的标签（Flag，HA等），可以选择更为廉价且可靠的标签抗体，替代针对蛋白质的一抗；
此外，伊莱瑞特具有更加便捷的标签抗体亲和凝胶，能预先将标签抗体与凝胶/磁珠共价偶联（如EA-IP-001）,大大减少IP实验的操作流程。利用免疫磁珠，甚至能比传统IP实验缩短1-2h时间！
免疫共沉淀
免疫共沉淀（Co-IP），是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础、用于研究蛋白质相互作用的经典方法，是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。
细胞在非变性条件下裂解，向细胞裂解液中加入特异性抗体——抗体能与已知的抗原形成抗原–抗体复合物。如果系统中存在与已知抗原相互作用的蛋白质，该蛋白质也会以复合物的形式沉淀下来，经过洗脱得到与已知抗原相互作用的蛋白质，再进行SDS-PAGE及Western blotting等分析。
IP/Co-IP实验操作流程
以Protein A/G凝胶磁珠产品为例, 货号：EA-IP-007M
1. 样品制备
对组织或者细胞进行裂解，通过破坏细胞膜或细胞核膜的屏障，将待研究的对象释放到体外环境中。
2. 目标蛋白与抗体-凝胶/磁珠复合物结合
将目标蛋白与抗体-凝胶/磁珠复合物进行孵育结合，设置对照抗体组和实验组。对照抗体组是为了排除非特异性结合的情况。
3. 目标蛋白洗脱
用变性洗脱法或者酸性洗脱法，洗脱目标蛋白；也可以直接加热，使目标蛋白分离，用于后期功能分析。
4. 检测分析
对洗脱后的样品进行SDS-PAGE、Western blotting或MS等分析。
IP抗体的选择
1. 抗体需要通过识别抗原的构象表位并与靶蛋白结合沉淀出来。只能识别线性表位的抗体一般IP效果不太理想。因此，开始IP实验前，一定要先确定所选抗体适用于IP实验；
2. 由于不同物种的不同蛋白亚型与结合蛋白（Protein A/G）的亲和力都不相同，选择亲和力强的组合，才能保证实验顺利；
3. 如果IP所涉及的目的蛋白带有相关标签（如Flag tag、HA tag等），那么实验中，既可以选择IP级别的抗体并配套相关凝胶/磁珠，也可以直接选用相关标签蛋白抗体凝胶/磁珠。
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针对蛋白 |
针对标签 |
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IP抗体选择 |
蛋白抗体 |
标签抗体 |
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介质选择 |
Protein A/G 凝胶/磁珠 |
Protein A/G 凝胶/磁珠 |
标签抗体 凝胶/磁珠 |
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举例 |
EA-IP-007 Protein A/G凝胶 |
EA-IP-007 Protein A/G凝胶 |
EA-IP-001 Anti-FLAG标签 亲和凝胶 |
为了满足更多用户的科研需求，伊莱瑞特基于多年研发经验，重磅推出23款IP系列新品，让您的IP/Co-IP实验更加方便快捷！
IP系列产品目录
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产品货号 |
产品名称 |
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EA-IP-007M |
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EA-IP-K001 |
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【 产品优势 】
高特异性：高亲和力，高效价，性质稳定
应用广泛：试剂齐全，涵盖主流标签
便捷高效：操作简单，利用免疫磁珠，比传统IP实验缩短1-2h
货源充足：大批现货，当天下单，最快当天可发
售后完善：强大的技术支持团队，提供专业解决方案
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