全新IP/Co-IP系列,简便易操作,高效助力实验
免疫沉淀和兔疫共沉淀,是许多蛋白质组学研究的重要步骤,用于检测蛋白质是否存在于样本中、测定蛋白的分子大小和相对丰度、确定蛋白丰度的上调和下调是否有效等。免疫沉淀常和其它检测实验串联进行,如: IP-ELISA、IP-WB、 IP-MS等。为满足更多用户的科研需求,伊莱瑞特重磅推出23款IP系列新品,让您的IP/Co-IP实验更加方便快捷。

免疫沉淀和免疫共沉淀,是许多蛋白质组学研究的重要步骤,用于检测蛋白质是否存在于样本中、测定蛋白的分子大小和相对丰度、确定蛋白丰度的上调和下调是否有效,及研究蛋白的稳定性、翻译后修饰、蛋白的相互作用等。免疫沉淀常和其它检测实验串联进行,如:IP-ELISA、IP-WB、IP-MS等。

免疫沉淀

免疫沉淀(IP)的原理,是将抗体与固相载体结合后,利用抗原抗体的特异性反应,从纯化混合物中富集目的蛋白的一种方法。目前最常用的固相载体是免疫磁珠和亲和凝胶。

免疫磁珠可以通过磁性吸附,快速精准地将抗原抗体复合物从混合体系分离出来,还能搭配自动化高通量检测仪使用;

亲和凝胶通过离心分离目的蛋白。凝胶具有更大的粒径和更高的抗体载量,因此也具有更强的吸附能力,在靶蛋白丰度较低时,能很好地富集到目的蛋白。

免疫沉淀原理+ + + + + + +

值得注意的是,如果靶蛋白是重组表达的,并且设计了相应的标签(Flag,HA等),可以选择更为廉价且可靠的标签抗体,替代针对蛋白质的一抗;

此外,伊莱瑞特具有更加便捷的标签抗体亲和凝胶,能预先将标签抗体与凝胶/磁珠共价偶联(如EA-IP-001),大大减少IP实验的操作流程。利用免疫磁珠,甚至能比传统IP实验缩短1-2h时间!


免疫共沉淀 

免疫共沉淀(Co-IP),是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础、用于研究蛋白质相互作用的经典方法,是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。

细胞在非变性条件下裂解,向细胞裂解液中加入特异性抗体——抗体能与已知的抗原形成抗原–抗体复合物。如果系统中存在与已知抗原相互作用的蛋白质,该蛋白质也会以复合物的形式沉淀下来,经过洗脱得到与已知抗原相互作用的蛋白质,再进行SDS-PAGE及Western blotting等分析。

IP/Co-IP实验操作流程

Protein A/G凝胶磁珠产品为例, 货号:EA-IP-007M

1. 样品制备

对组织或者细胞进行裂解,通过破坏细胞膜或细胞核膜的屏障,将待研究的对象释放到体外环境中。

2. 目标蛋白与抗体-凝胶/磁珠复合物结合

将目标蛋白与抗体-凝胶/磁珠复合物进行孵育结合,设置对照抗体组和实验组。对照抗体组是为了排除非特异性结合的情况。

3. 目标蛋白洗脱

用变性洗脱法或者酸性洗脱法,洗脱目标蛋白;也可以直接加热,使目标蛋白分离,用于后期功能分析。

4. 检测分析

对洗脱后的样品进行SDS-PAGE、Western blotting或MS等分析。


磁珠应用简化原理图

 IP抗体的选择 

1. 抗体需要通过识别抗原的构象表位并与靶蛋白结合沉淀出来。只能识别线性表位的抗体一般IP效果不太理想。因此,开始IP实验前,一定要先确定所选抗体适用于IP实验;

2. 由于不同物种的不同蛋白亚型与结合蛋白(Protein A/G)的亲和力都不相同,选择亲和力强的组合,才能保证实验顺利;

3. 如果IP所涉及的目的蛋白带有相关标签(如Flag tag、HA tag等),那么实验中,既可以选择IP级别的抗体并配套相关凝胶/磁珠,也可以直接选用相关标签蛋白抗体凝胶/磁珠。


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针对蛋白

针对标签

IP抗体选择

蛋白抗体

标签抗体

介质选择

Protein A/G

凝胶/磁珠

Protein A/G

凝胶/磁珠

标签抗体

凝胶/磁珠

举例

EA-IP-007

Protein A/G凝胶

EA-IP-007

Protein A/G凝胶

EA-IP-001

Anti-FLAG标签

亲和凝胶


为了满足更多用户的科研需求,伊莱瑞特基于多年研发经验,重磅推出23款IP系列新品,让您的IP/Co-IP实验更加方便快捷

IP系列产品目录

产品货号

产品名称

EA-IP-001

Anti-FLAG标签(DYKDDDDK)亲和凝胶

EA-IP-002

Anti-HA标签(YPYDVPDYA)亲和凝胶

EA-IP-003

Anti-MYC标签(EQKLISEEDL)亲和凝胶

EA-IP-004N

Anti-GFP标签纳米抗体亲和凝胶

EA-IP-005N

Anti-mCherry纳米抗体亲和凝胶

EA-IP-006N

Anti-MBP纳米抗体亲和凝胶

EA-IP-007

Protein A/G 琼脂糖凝胶

EA-IP-007M

Protein A/G 免疫沉淀磁珠

EA-IP-001M

Anti-FLAG标签(DYKDDDDK)免疫磁珠

EA-IP-002M

Anti-HA标签(YPYDVPDYA)免疫磁珠

EA-IP-003M

Anti-MYC(EQKLISEEDL)免疫磁珠

EA-IP-004MN

Anti-GFP纳米抗体免疫磁珠

EA-IP-005MN

Anti-mCherry 免疫磁珠

EA-IP-K001

Anti-FLAG标签(DYKDDDDK)快速免疫沉淀套装

EA-IP-K002

Anti-HA标签(YPYDVPDYA)快速免疫沉淀套装

EA-IP-K003

Anti-MYC标签(EQKLISEEDL)快速免疫沉淀套装

EA-IP-K007

免疫(共)沉淀(IP/CoIP)试剂盒(凝胶法)

EA-IP-K007M

免疫(共)沉淀(IP/CoIP)试剂盒(磁珠法)

EA-IP-K008

GST pull-down试剂盒(凝胶法)

EA-TP-K001

Anti-FLAG标签(DYKDDDDK)融合蛋白纯化试剂盒

EA-TP-K002

HA标签(YPYDVPDYA)融合蛋白纯化试剂盒

EA-TP-K003

MYC标签(EQKLISEEDL)融合蛋白纯化试剂盒


【 产品优势 】

高特异性高亲和力,高效价,性质稳定

应用广泛试剂齐全,涵盖主流标签

便捷高效操作简单,利用免疫磁珠,比传统IP实验缩短1-2h

货源充足大批现货,当天下单,最快当天可发

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ELISA上新!趋化因子Chemokines家族亮相
Elabscience推出的趋化因子指标:C趋化因子亚家族指标,CC趋化因子亚家族指标,CXC趋化因子亚家族指标,CX3C趋化因子亚家族指标。Elabscience还可提供趋化因子及趋化因子受体研究的抗体、蛋白、ELISA试剂盒产品,为相关疾病研究提供助力。