流式配色好难啊，我总是翻车……
别慌！接下来几期流式课堂文章将详细分析流式配色原则，助力大家的多色流式实验。今天先来看第一期流式配色原则解读：强弱搭配。
弱表达抗原搭配强荧光染料，强表达抗原搭配弱荧光染料，这是多色流式配色六大法则中的第一条，指的是目标Marker表达量和荧光素的强度要做到强弱搭配。
如果强表达抗原搭配强荧光染料，弱表达抗原搭配弱荧光染料，刚好强荧光对弱荧光有干扰的话，那么弱表达的抗原就会因为荧光干扰而看不到信号。这就好像白天，太阳出来了，我们就无法看到天上的星星一样。其实并不是星星真的消失了，而是太阳光太过强烈，导致星星的光被淹没了。
如下图所示：
CD4为强表达的抗原，选择弱荧光FITC，或是选择强荧光PE，对结果的影响并不大。
CD25为弱表达抗原，选择弱荧光PerCP/Cy5.5和CD4—PE搭配时，CD25的信号被淹没了一部分；CD25选择强荧光APC时，阳性信号就非常明显了。
待检测Marker的表达量，要参考相关资料或者文献来确定。要注意，抗原密度一定是在细胞亚群水平上确定的，并且，抗原密度也会由于激活状态而有所改变。
那哪些荧光染料是强荧光，哪些是弱荧光呢？别慌，已经帮大家整理出来了。染料荧光亮度分为very bright、bright、moderate、dim，也就是非常明亮、明亮、中等和较暗四种类型。荧光强弱如图所示：
如果大家使用的是表中未列出来的荧光标记，要如何判断荧光强弱呢？这时可以通过染色指数的大小来判断，染色指数越大说明染料荧光越亮。
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染色指数 Stain Index = D/W
D=阳性群峰值与阴性群峰值之差
W=阴性群的宽度
以上就是关于流式配色原则中“强弱搭配”的解读。更多流式配色干货，请持续关注流式课堂系列文章！