ELISA标曲异常的原因及对策(下)
分享在实验过程中遇到的ELISA标曲异常的相关案例,并详细解释其原因和对策,助力大家顺利开展实验

前段时间,我们发布了文章ELISA标曲异常的原因及对策(上)(点击查看),今天继续跟大家分享在实验过程中遇到的ELISA标曲异常的相关案例,并详细解释其原因和对策,助力大家顺利开展实验。

例5:显色正常,OD无法读值


标准品浓度

(pg/mL)

OD

1000

2.579

2.397

500

1.835

1.786

250

1.161

1.244

125

0.657

0.704

62.5

0.176

0.141

31.25

0.000

0.000

15.625

0.000

0.000

0

0.000

0.000

部分孔有肉眼可见的显色,却没有对应吸光值,可能是酶标仪检测波长没有设置到450nm或滤光片老化。建议确认波长或更换仪器进行检测。

例6:标准品浓度与吸光值呈反比


标准品浓度

(pg/mL)

OD

1000

0.387

0.375

500

0.503

0.508

250

0.699

0.692

125

0.988

0.990

62.5

1.336

1.325

31.25

1.668

1.674

15.625

1.919

1.913

0

2.265

2.258

竞争法是酶标抗原和标准品/样品中的抗原竞争性地结合抗体,样本中抗原浓度与吸光值呈现反比,这是正常情况哦~

例7:跳/花孔


标准品浓度

(pg/mL)

OD

1000

2.401

1.837

500

2.298

2.889

250

2.974

2.713

125

2.299

2.171

62.5

1.601

0.466

31.25

0.232

0.499

15.625

0.116

0.092

0

0.061

0.053

一般是上样时液体溅出、枪头触壁划伤包被抗原、甩板时液体反溅、洗板时液体溢出、拍板时在同一地方反复拍板造成的。建议避免以上情况,重新进行实验。

例8:复孔CV大

标准品浓度

(pg/mL)

OD值

平均OD值

标准偏差SD

变异系数CV

1000

3.401

2.732

3.067

0.473

15.43%

500

2.298

2.189

2.244

0.077

3.44%

250

2.074

1.713

1.894

0.255

13.48%

125

1.195

1.051

1.123

0.101

9.04%

62.5

1.001

0.466

0.734

0.378

51.57%

31.25

0.232

0.399

0.316

0.118

37.43%

15.625

0.116

0.092

0.104

0.017

16.32%

0

0.061

0.053

0.057

0.006

9.92%

可能原因

1) 液体量取体积不一致,使用前未混匀离心取上清;

2) 边缘效应:恒温箱温度并不完全恒温,可能会由于贴近箱壁,导致部分板条温度稍高;

3) 酶标板中液体有气泡,气泡会阻碍孵育时抗原抗体结合,读数时有气泡,会改变液体透光率;上机读数时,酶标板底有指纹或液体;

4) 酶标仪未提前开机预热,读值不稳定。

建议:

01 标准品加样时,可以单枪头从低浓度到高浓度垂直悬空添加,不换枪头,避免枪头误差;

02 孵育时,酶标板请勿堆叠,或放在贴近出风口和箱壁处;

03 离心管中有气泡,可通过低速离心去除;采用反向移液,枪头在液面下第二挡吸入液体,第一挡推出液体,适用于有一定粘度和有泡沫的液体操作;

04 酶标仪提前15分钟预热;上机读数前使用无尘布轻轻擦净板底。

例9:Origin拟合异常

使用Origin拟合标曲时,发现Fit Status显示Failed,因为标曲线性做到>0.999,越接近1,说明线性特征越明显, XY关系已经无限趋近于直线关系,可以继续使用该标曲~

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ELISA标曲异常的原因及对策(上)
ELISA实验中,标曲不仅能够帮助我们计算出样本浓度,还是指示实验人员操作手法是否规范的重要标志。本文介绍常见ELISA标曲异常的原因及对策