程浩 TUNEL常见问题及解决方案 细胞凋亡 属于程序性细胞死亡的一种,是受到特定基因调控后的主动性死亡过程,也是正常的细胞生理应答反应。在细胞凋亡晚期时,DNA会发生片段化,双链断裂,从而暴露出大量的3'-OH粘性末端,在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT)的作用下,将脱氧核糖核苷酸和荧光素、过氧化物酶、碱性磷酸酶或生物素形成的衍生物标记到DNA的3'-末端,通过荧光显微镜或流式细胞仪进行检测,这类方法称为 TUNEL法 (TdT-... 实验指南及答疑 2023-04-11
程浩 Annexin V常见问题分析及解决方案 不久前,发布了文章: Annexin V凋亡实验注意事项 (点击查看) , 给大家讲解了Annexin V实验中的注意事项,好多同学跟反馈说,这些细节问题我在实验的时候都注意了,但实验结果还是很不理想。 出现异常实验结果时,我们该怎么办呢? 我们需要认真对待失败的实验数据,分析总结实验失败的可能原因,这样才能有针对性地重新实验,得到理想的实验结果。 本篇文章将结合多年实验经验,为 大家带来Anne... 实验指南及答疑 2022-11-29
程浩 Annexin V凋亡实验注意事项 Annexin V是检测细胞早期凋亡的常用方法之一。实验操作虽然不算难,想要获得漂亮的流式结果图却并不容易,任何一个细节的疏忽都可能导致实验结果不理想。本篇文章带大家了解 Annexin V 实验过程中的注意事项,及不能忽视的实验细节 。 01 实验原理 Annexin V是一种分子量为35~36kD的 Ca 2+ 依赖性磷脂结合蛋白,能与磷脂酰丝氨酸(PS)高亲和力特异性结合 。在细胞凋亡早期,... 实验指南及答疑 2022-11-15
程浩 Annexin V实验对照设置 Annexin V实验对照设置 Annexin V 是常用的检测细胞凋亡的方法,一般通过流式细胞仪来检测。为保证实验结果的准确性,方便后续数据分析,通常需要设置不同对照实验组。 ①样本不带自发荧光 : 组别 Annexin V 核染料 样本类型 空白对照 - - 不做任何处理的细胞 生物学对照 + + 不做任何处理的细胞 单阳对照 1 + - 有明显凋亡的细胞 单阳对照 2 - + 有明显凋亡的细... 实验指南及答疑 2022-09-07
程浩 怎么选择合适的TUNEL 凋亡检测试剂盒 市面上常见的TUNEL产品主要有2大类,一类是 荧光TUNEL产品 (适用于荧光显微镜检测) ,一类是 DAB显色TUNEL产品 (适用于普通光学显微镜检测) 。在选择TUNEL产品时,首先要考虑自己的实验室的显微镜属于哪种。 对于有荧光显微镜的实验室,我们推荐使用荧光TUNEL产品,荧光TUNEL产品跟DAB显色TUNEL产品相比有以下优势: (1)实验时间短 (2)操作简便 (3)结果易观察 ... 实验指南及答疑 2021-06-08
程浩 Annexin V 凋亡试剂盒常见问题 Q: Annexin V 凋亡检测试剂盒的原理是什么? A: Annexin V是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸PS 有高度亲和力,可通过细胞外侧暴露的PS 与凋亡早期细胞胞膜结合,将Annexin V标记荧光染料如FITC利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡。 碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)或7-AAD可与双链DNA特异性结合,并产生强烈的荧光,正常情况下... 实验指南及答疑 2020-11-12
程浩 细胞周期检测实验步骤及注意事项 很多人在做细胞周期检测实验的时候,往往需要摸索较长时间条件才能得到稳定可靠的结果,这其中涉及到的因素比较多,为方便大家稳定可靠地获得理想数据,今天为大家详细介绍一下细胞周期检测实验的原理、流程以及注意事项。 细胞周期是指细胞从一次分裂结束起到下一次分裂结束为止的活动过程,分为间期与分裂期两个阶段。如下图: G0期: 这一期的细胞称为休眠细胞,细胞暂时脱离分裂周期,不进行DNA复制和分裂。但这些细胞... 实验指南及答疑 2019-08-12
程浩 细胞增殖和细胞毒性(CCK-8法)原理和经验总结 一、实验原理 细胞活力检测试剂盒(CCK-8) 可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。 其基本原理为:该试剂中含有WST-8【化学名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】,在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯(1-Methoxy PMS)的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物(Formazan dye)。... 实验指南及答疑 2019-07-10
程浩 Caspase活性检测系列(分光光度法)检测原理及操作指南 一、检测原理 Caspase (Cysteine-requiring Aspartate Protease)是在细胞凋亡过程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase在正常状态下以酶原的形式存在于胞浆中,没有活性;在细胞发生凋亡阶段,Caspase被激活,活化的Caspase可裂解相应的胞浆胞核底物,最终导致细胞凋亡。 Caspase分光光度法检测试剂盒的原理是将Caspase序列特异性的多肽偶联至... 实验指南及答疑 2019-07-10
程浩 流式细胞仪检测线粒体膜电位 一、线粒体膜电位检测原理 线粒体膜电位下降是细胞凋亡早期的标志性事件,发生在细胞核凋亡特征(染色质浓缩、DNA断裂)出现之前,一旦线粒体膜电位崩溃,细胞凋亡便不可逆转。 JC-1是一种广泛用于检测线粒体膜电位Ψm的理想荧光探针,可以检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。JC-1有单体和多聚体两种存在状态,两者发射光谱不同。在正常细胞内,线粒体膜电位较高,JC-1聚集在线粒体的基质中,形成聚合物,可产... 实验指南及答疑 2019-07-10
程浩 TUNEL检测细胞凋亡原则及经验总结 一、TUNEL法的实验原理 细胞发生凋亡时, 染色体DNA双链或单链断裂产生大量的粘性3'-OH末端,可在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT)的作用下,将脱氧核糖核苷酸和荧光素、过氧化物酶、碱性磷酸酶或生物素形成的衍生物标记到DNA的3'-末端,从而可进行凋亡细胞的检测,这类方法称为脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(terminal -deoxynucleotidyl transfera... 实验指南及答疑 2019-07-10
程浩 Annexin V流式检测细胞凋亡的数据分析方法 示例: 细胞用FITC-Annexin V / PI荧光双染细胞凋亡检测试剂盒检测效果图 Jurkat 细胞用 1 μ M 喜树碱 (Camptothecin) ( 左 ) 或未加药 ( 右 ) 处理 4h ,FITC-Annexin V/PI荧光双染细胞凋亡检测试剂盒染色后,流式细胞仪荧光检测。 Annexin V-FITC单阳性细胞为 早期凋亡细胞, Annexin V-FITC 和 PI 染... 实验指南及答疑 2019-03-29