Annexin V实验对照设置
Annexin V是常用的检测细胞凋亡的方法,一般通过流式细胞仪来检测。为保证实验结果的准确性,方便后续数据分析,通常需要设置不同对照实验组。
①样本不带自发荧光:
组别 |
Annexin V |
核染料 |
样本类型 |
空白对照 |
- |
- |
不做任何处理的细胞 |
生物学对照 |
+ |
+ |
不做任何处理的细胞 |
单阳对照1 |
+ |
- |
有明显凋亡的细胞 |
单阳对照2 |
- |
+ |
有明显凋亡的细胞 |
实验组 |
+ |
+ |
实验组细胞 |
②样本带自发荧光
组别 |
Annexin V |
核染料 |
样本类型 |
空白对照 |
- |
- |
不做任何处理无自发荧光的细胞 |
生物学对照 |
+ |
+ |
不做任何处理的细胞 |
单阳对照1 |
+ |
- |
无自发荧光有明显凋亡的细胞 |
单阳对照2 |
- |
+ |
无自发荧光有明显凋亡的细胞 |
单阳对照3 |
- |
- |
带自发荧光的细胞 |
实验组 |
+ |
+ |
实验组细胞 |
空白对照:调节阈值和仪器电压。
生物学对照:排除实验操作对实验结果的影响,扣除荧光背景,同时还可以作为实验组划门的依据。
单阳对照:调节补偿,同时也可以辅助调节该通道的电压,防止信号超出仪器接受范围。
注意事项:
*单阳对照组细胞一定要用明显有凋亡的细胞,因为调节补偿需要有足够的阳性信号
*样本带自发荧光需要设置三管单阳对照,确保每一管都只有一种荧光
实验组:检测实验结果。
Tips:
样本为贴壁细胞:
*细胞培养基中漂浮的细胞需要收集,与后续收集的贴壁细胞一起检测
*避免人为操作带来的细胞损伤,如:胰酶消化时间要适宜,消化贴壁细胞时操作要轻柔等
*尽量不使用含EDTA的胰酶,因为EDTA会影响Annexin V与PS的结合。如果一定要用含EDTA的胰酶,终止消化后要将细胞洗涤干净,尽量去除EDTA
*细胞比较难消化时可以分批次进行消化,避免先消化下来的细胞被过度消化导致假阳性结果