程浩 细胞核内因子染色流程 一、样本准备 详见 流式细胞术样本制备技术 1. 收集细胞,200目筛网过滤,收集滤液,300×g离心5 min,弃上清。 2. 向细胞中加入适量Cell Staining Buffer [E-CK-A107] ,用移液枪轻轻吹打细胞重悬。 二、细胞计数 用血球计数板或其他仪器对悬液进行计数后,调整细胞浓度约为1 × 10 7 /mL。 三、设置实验分组 根据实验设计,设置实验分组,每管加入100... 实验指南及答疑 2022-12-07
程浩 流式配色基本原则 流式细胞实验操作其实是非常简单的一个实验: 样本制成单细胞悬液+抗体加进去染色 实验就做完了 对于大多数新手来说 流式细胞实验前的指标选择和配色才是大家关注的重点 很多人通过文献知道自己要做什么指标 但不理解文献里面为什么要这样配色 是基于什么原因来做配色方案的? 下面,我们为大家带来“流式配色基本原则” 流式配色遵循以下基本规则: 强弱搭配 选择干扰少的荧光组合 使分析的复杂程度降到最低 谨慎使... 实验指南及答疑 2022-03-14
程浩 细胞内因子染色步骤 一、样本准备 详见 流式细胞术样本制备技术 1. 收集细胞,200目筛网过滤,收集滤液,300×g离心5 min,弃上清。 2. 向细胞中加入适量Cell Staining Buffer [E-CK-A107] ,用移液枪轻轻吹打细胞重悬。 二、细胞计数 用血球计数板或其他仪器对悬液进行计数后,调整细胞浓度约为1 × 10 7 /mL。 三、设置实验分组 根据实验设计,设置实验分组,每管加入100... 实验指南及答疑 2018-08-01
程浩 流式细胞表面染色步骤 一、样本准备 详见 流式细胞 术样本制备技术 1. 收集细胞,200目筛网过滤,收集滤液,300 g离心5 min,弃上清 2. 向细胞中加入适量细胞染色buffer(或含1%BSA的PBS),用移液枪轻轻吹打细胞重悬 二、细胞计数 用血球计数板或其他仪器对悬液进行计数后,调整细胞浓度约为1 × 10 7 /mL 三、设置实验分组 实验分组 作用 阴性/空白对照 调节仪器电压 单染/单阳对照 调节... 实验指南及答疑 2018-08-01
程浩 流式实验常见问题及解决方案 1.无染色/弱染色 可能的原因 解决方法 抗体贮存和操作不当 抗体应保存在2-8℃中,避光保存,同时避免反复冻融 荧光染料淬灭 荧光抗体和荧光抗体染色后的样本都应该避 光保存 自发荧光较高 改变抗体的荧光染料形式,避开与自发荧光相同发射光或者补偿较大的染料 染色时间和温度不正确 适当调整染色时间和温度 使用错误的染色液染色细胞内蛋白 为了获得最佳细胞内蛋白染色,应该使用正确的固定破膜剂进行细胞固定... 实验指南及答疑 2017-12-23
程浩 流式细胞术实验流程 流式细胞技术(Flow cytometry, FCM)是利用流式细胞仪进行的一种单细胞定量分析和分选技术。流式细胞术是单克隆抗体及免疫细胞化学技术、激光和电子计算机科学等高度发展及综合利用的高技术产物,它能有效地从单细胞水平区分异质性细胞群体,检测对象包括但不限于悬浮细胞、贴壁细胞或从实体组织分离的单细胞悬液和其他生物颗粒。 一、细胞表面染色步骤 1. 样本准备 1.1 采集全血或组织(脾,淋巴结... 实验指南及答疑 2017-12-22