抗体的化学本质是蛋白质，蛋白质是由氨基酸以脱水缩合的方式形成的。自然界中的氨基酸有几百种，但生物体内组成蛋白质的氨基酸只有约20种。氨基酸是含有碱性氨基和酸性羧基的有机化合物，自然界的氨基酸多数含伯胺。氨基酸脱水缩合时，一个氨基酸分子的羧基（-COOH）和另一个氨基酸分子的氨基（-NH₂）结合连接，同时脱去一分子水，这种结合方式叫做脱水缩合。经过脱水缩合，大部分氨基酸的伯氨基形成了酰胺键。氨基酸经过脱水缩合后，仍保留伯氨基的只有赖氨酸残基以及蛋白N末端的氨基酸。

图1. 氨基酸脱水缩合示意图（图片来自网络）

荧光标记所依赖的化合物称为荧光物质。荧光物质是指具有共轭双键体系化学结构的化合物，受到合适的激发光照射时，可跃迁成为激发态，当从激发态恢复至基态时，发出荧光。利用荧光物质共价结合或物理吸附在所要研究分子的某个基团上，可利用它的荧光特性来提供被研究对象的信息。

某些小分子荧光素或生物素等经过活化，在一定的pH及温度范围内，可以专一地与蛋白或者多肽上的伯胺基反应，形成稳定的酰胺键，从而实现标记物与蛋白或抗体的偶联。另外一些荧光素经过活化后，在一定条件下，可以与蛋白或抗体自身的，或额外引入的其他化学反应基团发生专一性反应，形成稳定的化学键，从而实现标记物与蛋白或抗体的偶联。

图2. 荧光染料分子与蛋白或抗体连接示意图

所以总结起来，荧光标记的原理是：活化的荧光素在一定的条件内，和蛋白或抗体上的活性基团发生反应，从而实现标记物与蛋白或抗体的偶联。荧光标记技术具有无放射物污染、操作简便等优点，这使得荧光标记的应用日趋广泛。

标记试剂盒