生物素-亲和素系统
生物素-亲和素系统(Biotin-Avidin—System,BAS)是70年代末发展起来的一种新型生物反应放大系统。生物素与亲和素之间高亲合力的牢固结合以及多级放大效应,使BAS免疫标记和有关示踪分析更加灵敏。BAS目前已广泛用于抗原、抗体的定性、定量检测及定位观察研究。

生物素-亲和素系统(Biotin-Avidin—System,BAS)是70年代末发展起来的一种新型生物反应放大系统。生物素与亲和素之间高亲合力的牢固结合以及多级放大效应,使BAS免疫标记和有关示踪分析更加灵敏。BAS目前已广泛用于抗原、抗体的定性、定量检测及定位观察研究。

生物素(biotin,B)广泛分布于动、植物组织中,常从含量较高的卵黄和肝组织中提取,分子量244.31Da.生物素分子有两个环状结构(如图1),其中Ⅰ环为咪唑酮环,是与亲和素结合的主要部位;II环为噻吩环,C2上有一戊酸侧链,其末端羧基是结合抗体和其他生物大分子的惟一结构,经化学修饰后,生物素可成为带有多种活性基团的衍生物——活化生物素(如图2)。




亲和素(avidin,AV)亦称抗生物素蛋白、卵白素,是从卵白蛋白中提取的一种由4个相同亚基组成的碱性糖蛋白,分子量为68kD。4个相同的亚基使每个亲和素能最多可结合4个分子的生物素。生物素与亲和素之间具有极强的亲和力,比抗原与抗体间的亲和力高得多。并且,二者的结合稳定性好、专一性强。

灵敏度

生物素易与蛋白质、核酸类及其他生物大分子结合,形成的生物素衍生物,不仅保持了大分子物质的原有生物活性,而且具有多价性。此外,每个亲和素分子有四个生物素结合部位,可同时以多价形式结合生物素化的大分子衍生物和标记物。因此,BAS具有多级放大作用,使其在应用时可极大地提高检测方法的灵敏度。

特异性

亲和素与生物素间的结合呈高度特异性。因此,BAS的多层次放大作用在提高灵敏度的同时,并不增加非特异性干扰。而且,BAS结合特性不会因反应试剂的高度稀释而受影响。因此,在实际应用中可最大限度地降低反应试剂的非特异作用。

稳定性

亲和素结合生物素的亲和常数可为抗原-抗体反应的百万倍,二者结合形成复合物的解离常数很小,呈不可逆反应性;而且酸、碱、变性剂、蛋白水解酶以及有机溶剂均不影响其结合。因此,BAS在实际应用中,产物的稳定性高,从而可降低操作误差,提高测定的精确度。

适用性

生物素及亲和素可形成各种各样的衍生物。这些衍生物可通过标记物(如酶、荧光素或放射性元素)用于一系列检测和分离纯化,包括细胞、组织、体液中的抗原-抗体、激素-受体、核酸系统等。同时一些已上市的基于BAS的试剂也为临床诊断和科研提供了便利。

其他

BAS可根据具体实验方法要求制成多种通用型试剂(如生物素化第二抗体等)适用于不同的反应体系,而且都可高度稀释,用量很少,实验成本低;尤其是BAS与成本高昂的抗原特异性第一抗体偶联使用,可使后者的用量大幅度减少,节约实验费用。此外,由于生物素与亲和素的结合具有快速、高效的特性,尽管BAS的反应层次较多,但所需的温育时间不长,实验往往只需数小时即可完成。

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