Annexin V流式检测细胞凋亡的数据分析方法
Annexin V探针是一种最常用来检测细胞凋亡的方法。用标记了荧光素的Annexin V作为荧光探针,并搭配Propidium iodide(PI)、7-AAD、DAPI等核酸染料使用,能够准确区分正常细胞、凋亡早期和凋亡晚期细胞。本文介绍Annexin V流式检测细胞凋亡的数据分析方法,通过实际案例,让大家更深入地了解Annexin V流式实验结果分析。

示例:

细胞用FITC-Annexin V / PI荧光双染细胞凋亡检测试剂盒检测效果图


Jurkat细胞用1μM喜树碱(Camptothecin) ()或未加药 ()处理4h,FITC-Annexin V/PI荧光双染细胞凋亡检测试剂盒染色后,流式细胞仪荧光检测。

Annexin V-FITC单阳性细胞为早期凋亡细胞,Annexin V-FITCPI染色双阳性的细胞为坏死细胞或者晚期凋亡。PI单染色阳性位裸核细胞。

实测数据可能会因细胞类型、细胞凋亡情况,检测仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。



流式检测细胞凋亡的数据分析方法:

1) 选中所有颗粒,将FSC和SSC设置成对数坐标轴模式备用;

2) 将横轴和纵轴分别设成Annexin通道和PI通道(7-AAD与此类似),选取双阴细胞群;

3) 在双阴细胞门中,将横轴和纵轴分别设成FCS和SSC,将数据呈现方式改为轮廓图,找到细胞碎片,划出碎片门,应用于所有细胞;

4) 在所有细胞中,反选碎片门,得到所有细胞;

5) 将横轴和纵轴分别设成Annexin通道和PI通道,参照未经药物处理的对照组,划出十字门,确定不同群细胞的比例。

Annexin V荧光双染细胞凋亡检测试剂盒实验操作指南
Annexin V是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸PS有高度亲和力,可通过细胞外侧暴露的PS与凋亡早期细胞胞膜结合,将Annexin V标记上荧光染料利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡。本文主要介绍Annexin V实验的主要操作步骤及实验的一些注意事项。