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目的 |
样本 |
设置 |
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调电压 |
1 |
Blank（空白管） |
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调补偿 |
2 |
CD3- PerCP/Cyanine5.5 |
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3 |
CD4- FITC |
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4 |
IL-17A PE |
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PE-FMO联合同型对照划门 |
5 |
CD3- PerCP/Cyanine5.5、CD4- FITC、Mouse IgG1, κ Isotype Control-PE |
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Full Panel |
6 |
CD3- PerCP/Cyanine5.5、CD4- FITC、IL-17A- PE |
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指标 |
荧光标记 |
克隆号 |
货号 |
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CD3 |
PerCP/Cyanine5.5 |
UCHT1 |
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CD4 |
FITC |
SK3 |
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IL-17A |
PE |
BL168 |
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Mouse IgG1, κ Isotype Control |
PE |
MOPC-21 |
1. PBMC分选后，需要先用细胞因子刺激阻断剂进行刺激阻断培养（本实验用到试剂为：细胞因子激活和蛋白阻断试剂盒（E-CK-A091）；培养条件为：刺激剂刺激培养1 h后加入阻断剂，再培养4.5 h），再收集细胞进行后续流式实验。
2. PMA刺激会导致人T细胞表面CD4部分内吞，因此我们需要选用对内吞影响小的CD4克隆号抗体SK3。
3. IL-17A需要做同型对照，因为一般情况下细胞因子表达量不高。
4. Th17细胞表型为CD3+CD4+ IL-17A+。
5. 破膜剂对细胞损伤较大，建议离心后形成的细胞沉淀先弹散成细胞悬液后再加入破膜剂，以减少细胞损伤。