程浩 如何提高ELISA的精确重现性 免疫检测法的精确性表现为单次实验孔间(批内)的重复性和多次实验之间(批间)的重复性。CV值高则表明精确度低,通常由以下两个原因造成:移液技术和洗涤技术。 移液技术 1. 移液时,枪头应对准孔中央,避免接触孔壁及底部。 2. 移液后轻轻晃动混匀试剂。 3. 如果您的样品具有黏性,请预先润洗枪头以消除表面张力的影响。吸液时等待片刻使体积平衡后再取出。 4. 移液不充分或移液体积不均,说明移液器需要校正... 实验指南及答疑 2017-08-30
程浩 ELISA提示 ELISA 实验失败可能由多种因素造成。在实验前阅读并充分了解产品说明书,可以一定程度上避免出现意想不到的结果。 参考以下提示来避免实验出现问题。 1. 检查试剂盒的保质 期,保 证所有试剂按说明书上的建议正确保存; 2. 检查试剂溶液是否存在不稳定或降解迹象,如沉淀或变色等; 3. 底物溶液应为无色; 4. 试剂制备和保存时应使用干净的一次性塑料吸量管、枪头和容器。每次加液(样品、标准品及其他试... 实验指南及答疑 2017-08-30
程浩 双抗体夹心法ELISA操作视频 本视频为 Elabscience ® 公司ELISA试剂盒(双抗体夹心法)的操作指南,对每一步的反应都做了演示,以便实验者能更好地理解ELISA实验的过程。 夹心法原理: 用特异性抗体包被于酶标板上,实验时样品或标准品中的抗原会与包被抗体结合,游离的成分被洗去。依次加入生物素化的特异性抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。生物素化的特异性抗体与结合在包被抗体上的抗原结合、生物素与亲和素特异性结合而形成... 实验操作视频 酶联免疫吸附实验(ELISA) 2016-10-26
程浩 ELISA结果计算 作为ELISA的最后一步,检测结果的计算对整个实验十分重要。 以夹心法为例。 1. ELISA的样本通常要设置1~2个复孔进行检测,分别求出标准品、实验组样本的吸光度的平均值。单个样本的检测值不应超出平均值的20%。 2. 样本的OD(吸光度)平均值要减去标准品浓度为0时的OD平均值。 3. 建立标准曲线 在对数坐标图上拟合四参数的逻辑函数曲线(X轴上为标准品浓度,Y轴为对应的OD值)。推荐使用o... 实验指南及答疑 2016-01-22
程浩 夹心法ELISA操作步骤 实验开始前,各试剂和样本均应平衡至室温;样本复融后需再次离心,取上清检测;试剂或样本配制时,需充分混匀并尽量避免起泡;标曲和样本建议做复孔检测。 1. 加样 :将 标准品工作液 依次加入到前两列孔中,每个浓度的工作液并列加两孔,每孔100 μL。待测样品加入到其他孔,每孔100 μL(若样本浓度高于检测范围,需用 标准品&样本稀释液 稀释后取样)。给酶标板覆膜,37℃孵育90分钟。提示:加样时将样... 实验指南及答疑 2015-08-16
程浩 竞争法ELISA操作步骤 实验开始前,各试剂和样本均应平衡至室温;样本复融后需再次离心,取上清检测;试剂或样本配制时,需充分混匀并尽量避免起泡;标曲和样本建议做复孔检测。 1. 加样 :将 标准品工作液 依次加入到前两列孔中,每个浓度的工作液并列加两孔,每孔50 μL。待测样品加入到其他孔,每孔50 μL(若样本浓度高于检测范围,需用 标准品&样本稀释液 稀释后取样)。立即每孔加入配好的 生物素化抗体工作液 50 μL。混... 实验指南及答疑 2015-08-16
程浩 ELISA实验样本处理方法 常规用于ELISA实验的样本包含血清、血浆、细胞培养上清、尿液以及组织匀浆等。不同样本类型的预处理方法存在差异,合适的样本预处理是确保ELISA实验正确性和准确性的第一步。这里,我们将介绍几种不同样本类型的处理方法。 1. 血清 血清是ELISA实验最常用的样本,其预处理也十分简单。 使用无热原无内毒素的试管或离心管采集血液样本,将试管或离心管在室温下放置1小时或4℃过夜,分离出血清(建议倾斜试管... 实验指南及答疑 2014-06-17
程浩 生物素-亲和素系统 生物素-亲和素系统(Biotin-Avidin—System,BAS)是70年代末发展起来的一种新型生物反应放大系统。生物素与亲和素之间高亲合力的牢固结合以及多级放大效应,使BAS免疫标记和有关示踪分析更加灵敏。BAS目前已广泛用于抗原、抗体的定性、定量检测及定位观察研究。 生物素(biotin,B)广泛分布于动、植物组织中,常从含量较高的卵黄和肝组织中提取,分子量244.31Da.生物素分子有两... 实验指南及答疑 2014-06-03