ELISA实验FAQs之实验结果OD值偏低
本文汇总了常见的ELISA实验结果OD值偏低的原因及对策,助力ELISA实验研究

ELISA是一个非常严谨、极其考验操作者技巧和经验的实验,检测结果数值低、标准曲线梯度差、背景值高、变异系数大等诸多问题也是兵家常事。

本文将常见的ELISA实验结果OD值偏低的原因及对策进行了汇总,具体如下!

整体OD值偏低或无信号

可能原因

相应对策

试剂盒组分失活

使用新的试剂盒,按照说明书要求保存试剂盒

试剂盒组分未平衡

试剂盒每个组分都需要平衡至室温后进行实验

试剂混用或混合不充分

保证使用试剂盒内完整一套试剂进行实验,保证溶液充分混合

洗液被污染

配制新的洗液

洗涤液浸泡时间过久或洗板次数过多

按照说明书的要求进行操作

孵育时间不充分

保证充足的孵育时间

孵育温度不稳定

检查恒温箱,确保孵育温度稳定

生物素化抗体或HRP酶结合物不足

保证浓缩液取量准确且稀释完全

生物素化抗体或酶结合物稀释不正确或步骤颠倒

按照说明书的步骤和要求进行操作

未加终止液

反应结束时,确保每孔加入终止液终止反应

终止后未及时读板

终止液终止反应后需要在10min内进行读板操作

酶标仪设置错误

在酶标仪上检查波长和滤光片设置

标曲OD偏低但样本OD值正常

可能原因

相应对策

标准品部分降解

按照说明书推荐方式保存标准品。开封后的标准品应以最高浓度用EP管分装冻存,保存于-20℃,半个月内使用有效

标准品复溶不当

打开前将标准品短暂离心,检查复溶后是否有未溶解的物质

标准品稀释不正确

按照说明书要求,保证按正确倍比梯度稀释

标曲线性佳但样本OD值偏低

可能原因

相应对策

基质效应

稀释样本可以降低基质效应

钩状效应

预估样本浓度选择合适的稀释倍数,并通过预实验选择最佳稀释倍数

靶蛋白丰度不足

重复实验,浓缩样本或选用灵敏度更高的试剂盒

样本处理或保存不当

确保正确采集与保存样本,避免反复冻融

样本类型不适用

检测的样本类型不分泌检测的因子、不是均质澄清溶液(高脂/粘稠溶剂)、重组蛋白不能匹配抗体。应选择与检测样本类型相匹配的ELISA试剂盒

以上,是分享给大家的常见ELISA实验结果OD值偏低的原因及对策,更多问题欢迎咨询网站右侧在线客服~

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