数据还是对不上?Annexin V&CCK-8结果关联性分析
本文主要介绍Annexin V与CCK-8之间的关系,并分析CCK-8与Annexin V的结果关联性。CCK-8检测的是样本中的脱氢酶总活力,只要待测样本中的脱氢酶活力改变了,CCK-8检测的OD就会随之改变。Annexin V检测的是样本中暴露在细胞表面的磷酯酰丝氨酸(PS)。在分析CCK-8与Annexin V结果关联性之前,一定要先排除Annexin V检测中出现的各种异常情况。

前不久,我们发布了文章:流式课堂 | 数据对不上?细胞周期&CCK-8结果关联性分析 (点击查看)给大家讲解了CCK-8与细胞周期之间的联系,很快就有小伙伴来问了:

我的实验结果还是有问题啊,周期的结果是和CCK-8对上了,但是Annexin V凋亡结果还是和CCK-8对不明白。


别急,今天就带大家来看看Annexin VCCK-8之间的关系


解题思路还是一样的,要搞清楚Annexin V与CCK-8之间的关系,就要先弄清楚他们的真实检测指标:


CCK-8

Cell Counting Kit-8

CCK-8检测的是样本中的脱氢酶总活力,只要待测样本中的脱氢酶活力改变了,CCK-8检测的OD就会随之改变。同时,因为CCK-8检测结果最终反映为OD值,其他原因带来的颜色变化也可能导致OD值改变。更多CCK-8异常原因及排除方法在以前的文章中有详细介绍,有兴趣的小伙伴可以点击查看(流式课堂 | 数据对不上?细胞周期&CCK-8结果关联性分析)。


Annexin V

Annexin V检测的是样本中暴露在细胞表面的磷酯酰丝氨酸(PS)。通常情况下,与Annexin V搭配使用的核染料,能够进入到细胞膜通透性改变的细胞内部,与其中的核酸进行结合。

Annexin v检测不同时期凋亡原理示意图


根据实验原理可知,只要细胞膜表面有磷酯酰丝氨酸(PS),就能和Annexin V结合;只要核染料能进入细胞内,同时细胞内有核,即可被核染料结合。据此,在分析CCK-8与Annexin V结果关联性之前,一定要先排除Annexin V检测中出现的各种异常情况


1. 正常血小板的外表面即含有大量的磷酯酰丝氨酸(PS),因此无法用Annexin V进行血小板的凋亡检测;

2. 哺乳动物成熟的红细胞及血小板均没有细胞核,因此核染料无法与此类细胞进行结合;

3. 某些药物可能会破坏磷酯酰丝氨酸(PS)或DNA,从而导致检测试剂无法正确结合;

4. 贴壁细胞发生凋亡时,晚凋细胞会漂浮起来,未收集上清可能导致晚凋群体缺失;

5. 细胞接种密度过高,从而导致细胞被“挤死”;

6. 更多Annexin V样本制备及上机检测异常排除相关内容,请移步Annexin V凋亡实验注意事项


解决完以上异常情况后,就可以来正式分析CCK-8与Annexin V的结果关联性了:

CCK-8

Annexin V

参考原因

抑制增值

凋亡率增加

进行细胞处理后,引起细胞凋亡,从而抑制细胞增殖,为常见情况

凋亡率减少

进行细胞处理后,细胞生长速度减缓,或进入休眠

凋亡率不变

1. 细胞处理强度不够,不足以引起凋亡

2. 抑制效果并非由凋亡途径引起

促进增殖

凋亡率增加

常见于炎症反应,免疫细胞快速增殖,响应炎症反应后死亡

凋亡率减少

治疗保护类药物,可优化细胞状态,促进增殖,减少凋亡

凋亡率不变

进行细胞处理后,增殖发生变化,但细胞状态无明显变化,属正常情况


本期流式干货分享就到这里,希望能够帮助大家更顺利的完成实验。


数据对不上?细胞周期&CCK-8结果关联性分析
CCK-8检测的是样本中脱氢酶总活力,细胞周期检测的是每个细胞的核酸含量。分析CCK-8与周期关系之前,需要排除异常原因带来的结果变化,然后再看CCK-8与细胞周期之间存在的变化关系