1. 超滤管的应用
① 浓缩或纯化生物样本。
② 纯化组织培养提取液或细胞裂解液中的大分子成分,去除反应液中的引物、接头或分子标记,在HPLC前去除蛋白质。
③ 除盐,缓冲液更换,或渗滤。
2. 超滤管使用
① 预处理:
新超滤管:使用前用纯水浸泡,冰箱预冷10 min。然后将水倒出,置于冰上预冷2-5 min,加样。
旧超滤管:倒出管内的乙醇浸泡液,用纯水冲洗干净10遍(注意水流速尽量平缓,防止冲破滤膜),置于冰上预冷2-5 min,加样。
② 加样:
如超滤管中有少许残留水可将超滤管内管倒置1000×g离心1 min,移液枪移取适量样本加入超滤管中。
③ 离心:
配平,12000 ×g离心(15-30 min),等达到目的转速后方可离开。
④ 样本收集 :
外管滤液为除去部分蛋白的样本上清,如需取浓缩后样本用于其他实验,则另取外管,内管倒置,1000×g离心1-2 min。
⑤ 超滤管清洗
使用完的超滤管用纯水反复清洗5次,再用75%乙醇冲洗3次。
3. 存放与保存
① 短时间存放与保存:0.1 M的NaOH浸泡1-2 h,纯水清洗,然后用75%乙醇浸泡,务必使滤膜保持湿润,不能长菌。
② 长时间放置超滤管处理:0.1 M的NaOH浸泡1-2 h,纯水清洗,然后用20%乙醇浸泡,务必使滤膜保持湿润,不能长菌。
4. 注意事项
① 超滤管最大离心力不能超过12000g ,否则会导致滤膜破损。
② 超滤样本会损失五分之一至二分之一的样本量,主要取决于样本中蛋白含量。
③ 若管底有可见的蛋白沉淀,可以先加入纯水,然后用枪头吹打,注意不要碰到膜,吹打至沉淀悬起,然后倒掉,不可用自来水猛冲。
④ 超滤管内管不能用烘箱进行烘干。