今天为大家介绍一个在流式实验中非常重要,但却常常被忽视的一个参数—Time。
什么是Time?
Time即“时间”—通常与其他参数共同使用,反映该参数在上机过程中的实时变化情况。这可以给我们带来非常多的信息,让我们在上机时能够获得更加准确全面的分析结果。下面我们就一起来看看Time参数具体的使用场景吧!
首先是在液流稳定性检测上的应用。相信大家在做流式实验时都听说过液流稳定性的重要性。在流式实验时一定要注意液流稳定性,液流不稳定流式结果就会变的很差,还可能出现仪器分辨率下降,CV值变大,甚至检测信号丢失的情况。既然液流稳定性这么重要,怎么去观察液流是否稳定呢?这里就需要用到数量与时间门的组合。
图一:液流稳定时流式图
如图所示,将横坐标选择为Time,纵坐标选择为Count,就可以看到样本的实时上机速度。正常情况下样本上机速度应基本保持均一。
图二:蠕动泵管老化时流式图
如图二所示,将横坐标选择为Time,纵坐标选择为Count,就可以看到样本的实时上机速度。在图示结果中,我们可以很清晰的看到样本液流非常不稳定,速度时快时慢,且中间还会有很多时间吸取不到样本。这对数据采集是非常不利的,在实验当中碰到这样的结果就一定要小心,必要时可重新上样检测。
液流不稳定可能有多种原因,比如管道堵塞、蠕动泵管老化等。我们对Time图进一步分析,可以找到具体引起液流不稳定的原因。在图二中,我们可以看到液流变化呈现很明显的周期性规律,这种情况是由于蠕动泵管某一段老化引起,每次挤压到这部分泵管时,就会出现吸取不到样本的情况,此时就需要更换蠕动泵管。
如果是管道堵塞,Time图则大概率会是如下两种情况:
图三 管道暂时性堵塞流式图 图四 管道永久性堵塞流式图
在图三中可以看到,在出现一大段吸取不到样本的时间后,突然出现了一段很快的上样速度。这往往是由于样本将管道堵塞,导致吸取不到样本。随着上样时间的延续,管道内压力不断加大,在达到一定压力后,堵塞部分突然被冲开,大量细胞通过,导致上样速度陡增。当然,也有可能出现堵塞更加严重,最终直接导致管道堵死的情况(如图四所示)。所以,在发现仪器出现堵塞的情况时,一定要及时停止上样,做好相应的清洗,并检查样本是否有结团或者细胞密度过大的情况,选择相应的过筛网或对样本做适当稀释。
当然,Time的应用远远不止判断液流稳定性。如与荧光通道结合,可以找到上机过程中因仪器不稳定、前一管样本残留等各种意外情况出现的不合理数据,并通过画门排除掉这部分数据,以得到更加真实可靠的结果(如图五所示,蓝框部分荧光信号明显与整体样本不符,在实际分析时应排除掉此部分)。
图五 时间门与荧光通道设门流式图
同时,在检测一些表达量会随时间快速变化的指标时,也可以打开Time来观察指标的实时变化情况。
今天关于Time参数的分享就到这里了,各位小伙伴在实际实验过程中是否还有其他关于Time参数的应用呢?