联合CD45及SSC设门的意义
本文主要介绍CD45的特点,及通过CD45与SSC-H来圈出淋巴细胞亚群的意义,帮助客户在进行流式数据分析时更准确的圈出淋巴细胞亚群。

在《人外周血调节性T细胞鉴定方案》中,我们用到了CD45这个指标圈门。有疑问指出:人外周血中,所有的白细胞表面都表达CD45,做外周血的样本不需要多此一举,去添加一个CD45抗体。通过FSC/SSC,就能直接圈出淋巴细胞亚群

做免疫细胞分型时,CD45真的可有可无吗?下面我们来聊一聊,CD45的特点,及通过CD45与SSC-H来圈出淋巴细胞亚群的意

CD45由一类结构相似、分子量较大的跨膜蛋白组成,广泛存在于白细胞表面。CD45分子在所有白细胞上都有表达,是细胞膜上信号传导的关键分子,在淋巴细胞的发育成熟,功能调节及信号传递中具有重要意义,其分布可作为某些T细胞亚群的分类标志。

CD45/SSC-H与FSC-H/SSC-H分群对比

图一:CD45/SSC-H与FSC-H/SSC-H分群对比

如左图所示,通过CD45与SSC-H,可以非常快速地圈出淋巴细胞亚群。

 如右图所示,使用FSC-H与SSC-H确定细胞群分布时,如果不染CD45,加上有时红细胞裂解效果不佳,淋巴细胞群容易与红细胞及细胞碎片分群不清晰,且易有单核细胞混杂,不利于圈门位置的确定。而通过CD45/SSC圈门,可以使圈出的淋巴细胞更纯。

中华人民共和国卫生行业标准文件中的《流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群指南》也指出:建议联合CD45和SSC设门,确定淋巴细胞群。淋巴细胞群通常呈现CD45强阳性和SSC弱表达;相对于淋巴细胞,单核细胞的CD45呈弱表达,SSC呈中等强度表达;嗜碱性粒细胞的CD45和SSC均为弱表达。同时,CD45在三色、四色抗体组合方案的每一检测标本管中均存在,在对淋巴细胞群进行设门的同时,也具有监测和评估标本管间变异性的作用。

外周血CD45与SSC细胞分群散点图

 图二:外周血CD45与SSC细胞分群散点图

那么,在哪些情况下,一定要染CD45呢?

例如,有些病人的外周血样本分布,与正常样本存在较大差异时,必须通过CD45来分出淋巴细胞亚群。

此外,目前研究较多的肿瘤样本,在检测免疫细胞分群时,也一定要染CD45。因为肿瘤组织处理的单细胞悬液中,大部分是肿瘤细胞与组织细胞,免疫细胞的含量一般较少,如果不染CD45,将导致结果无法分析。

综上,当样本处理不佳或样本类型特殊,无法通过FSC/SSC区分出明确的免疫细胞形态时,联合CD45及SSC设门,是十分关键且必要的


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人外周血调节性T细胞鉴定方案
Foxp3是目前公认的调节性T细胞最特异的指标,但因其位于细胞内,使得Foxp3的染色必须要固定细胞并破核膜。CD127属于细胞表面Marker,无需固定破膜。因此,当前主流方向是通过CD127来检测人Tregs。本文总结了人外周血调节性T细胞完整鉴定方案,包括配色方案、所需流式抗体、辅助试剂、样本管设置、实验步骤、实验结果等,帮助客户轻松鉴定人外周血调节性T细胞。