本视频为Elabscience®公司QuicKey ELISA®试剂盒的操作指南,对每一步的反应都做了演示,以便实验者能更好地理解ELISA实验的过程。
QuicKey ELISA®原理:
该试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。将特异性抗体包被于酶标板上,实验时样品(或标准品)及生物素化的特异性抗体同时加入,样品(或标准品)中的抗原会与包被抗体结合,同时生物素化抗体与结合在包被板上的抗原结合,游离的成分被洗去。再加入辣根过氧化物酶标记的亲和素,生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物,游离的成分被洗去。加入显色底物(MB),TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色,加终止液后变成黄色。用酶标仪在450 nm波长处测OD值,抗原浓度与OD值之间呈正比,通过绘制标准曲线计算出样品中抗原的浓度。