问题 |
原因 |
建议 |
结果中显色过深 |
一抗浓度过高或孵育时间过长 |
降低一抗浓度或减少孵育时间 |
孵育温度过高 |
室温或4 ℃孵育 |
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HRP标记二抗孵育时间过长 |
缩短时间 |
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IHC结果中非特异性显色 |
石蜡切片脱蜡不彻底 |
延长脱蜡时间 |
操作过程中冲洗不充分 |
增加冲洗的次数与冲洗时间 |
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组织富含内源性的生物素与过氧化物酶 |
使用相关试剂进行封闭 |
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发生抗原异位 |
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蛋白封闭不充分 |
增加蛋白封闭时间 |
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IHC结果中显色强度弱 |
一抗浓度过低或孵育时间过短 |
增加一抗浓度或延长孵育时间 |
试剂超过保质期 |
实验前确认试剂的保质期 |
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操作过程冲洗过度 |
适度冲洗 |
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IHC结果中无染色 |
组织中无目的抗原的表达 |
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一抗种属来源与二抗不匹配 |
实验前确认一抗的种属来源 |
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显色物质与HRP系统不匹配 |
实验前确认显色体系 |