在前两期的流式课堂中,我们分别探讨了Th1和Th2细胞,以及Th17细胞在免疫反应中的角色。今天,我们将转向另一种关键的T细胞亚群——调节性T细胞(Treg细胞)。在免疫系统的复杂网络中,Treg细胞以其独特的免疫抑制功能,扮演着维护机体免疫平衡的关键角色。那么,Treg细胞是如何工作的?又是如何鉴定的?接下来和小E老师一起开始这次对Treg细胞的深入探索之旅吧!
一、Treg细胞简介
Treg细胞,全称调节性T细胞(Regulatory T cells),是一类具有显著免疫抑制作用的T细胞亚群。当机体在面对外来入侵的细菌、病毒等有害物质时,会产生免疫应答反应。部分免疫细胞(如T细胞及B细胞)会识别和清除有害物质,从而保护机体。然而,过度的免疫应答反应会损伤机体自身,在免疫细胞识别和清除了有害物质后,Treg细胞会发出攻击停止信号,通过释放免疫抑制性细胞因子和杀伤分子,抑制效应性T细胞增殖,同时诱导效应性T细胞凋亡,对免疫反应进行调节。Treg细胞在机体免疫反应过程中不可或缺,它可调节机体免疫稳态,从而阻止自身免疫性疾病。
图1. Treg细胞发育流程
二、Treg细胞鉴定方法介绍
在许多免疫疾病研究中,常常需要检测Treg细胞,对机体的免疫情况进行研究。要检测淋巴细胞中的Treg细胞,可以通过流式细胞术和流式抗体进行检测。目前最常用的鉴别Tregs的标志Marker是CD4、CD25、CD127和Foxp3。以下为检测人和小鼠Treg细胞的参考案例。
小鼠脾脏Treg(3色)检测
Panel Design &样本管设置:
目的 | 样本 | 设置 |
调电压 | 1 | Blank(空白管) |
调补偿 | 2 | CD4-FITC |
3 | CD25-APC | |
4 | Foxp3-PE | |
APC-FMO联合同型对照划门 | 5 | CD4-FITC、Foxp3-PE、Rat IgG1, κ Isotype Control-APC |
PE-FMO联合同型对照划门 | 6 | CD4-FITC、CD25-APC、Mouse IgG1, κ Isotype Control-PE |
Full Panel | 7 | CD4-FITC、CD25-APC、Foxp3-PE |
流式抗体信息:
指标 | 荧光标记 | 克隆号 | 货号 |
CD4 | FITC | GK1.5 | |
CD25 | APC | PC-61.5.3 | |
Foxp3 | PE | 3G3 | |
Rat IgG1, κ Isotype Control | APC | HRPN | |
Mouse IgG1, κ Isotype Control | PE | MOPC-21 |
图2. 小鼠Treg细胞检测实验结果图
人外周血Treg(6色)检测
Panel Design &样本管设置:
目的 | 样本 | 设置 |
调电压 | 1 | Blank(空白管) |
调补偿 | 2 | CD45-Elab Fluor® Violet 450 |
3 | CD3-Elab Fluor® Red 780 | |
4 | CD4-FITC | |
5 | CD8a-PerCP/Cyanine5.5 | |
6 | CD25-PE | |
7 | CD127-Elab Fluor®647 | |
Full Panel | 8 | CD45-Elab Fluor® Violet 450、CD3-Elab Fluor® Red 780、CD4-FITC、CD8a-PerCP/Cyanine5.5、CD25-PE、CD127-Elab Fluor®647 |
流式抗体信息:
指标 | 荧光标记 | 克隆号 | 货号 |
CD45 | Elab Fluor® Violet 450 | HI30 | |
CD3 | Elab Fluor® Red 780 | OKT3 | |
CD4 | FITC | RPA-T4 | |
CD8a | PerCP/Cyanine5.5 | OKT-8 | |
CD25 | PE | BC96 | |
CD127 | Elab Fluor®647 | A019D5 |
图3. 人Treg细胞检测实验结果图
除了流式细胞术检测外,也可以通过一些分子生物学方法,如实时PCR检测Foxp3基因的表达水平来进行检测Treg细胞。
三、Treg细胞鉴定意义及应用
自身免疫性疾病:检测及关注淋巴细胞内Treg细胞状态,可以帮助研究多种领域疾病,如I型糖尿病等,这些自身免疫性疾病与Treg细胞相关。
炎症:Treg细胞可以分泌细胞抗炎因子抑制自身炎症反应,防止引起组织破坏的病理性免疫应答发生。Treg细胞功能缺陷或缺失可直接导致炎症性疾病的出现。因此,在炎症类疾病中,Treg细胞发挥着重要的作用。
肿瘤研究:在关于肿瘤的研究中发现,Treg细胞可通过免疫抑制作用,使机体对肿瘤细胞产生抗原耐受,使得肿瘤细胞逃脱机体的免疫杀伤作用,导致免疫逃逸。因此,在关于肿瘤治疗的研究中,Treg细胞的鉴定及检测也具有重要的意义。
以上就是本期关于Treg细胞的介绍,大家有相关问题欢迎大家留言!更多免疫细胞干货,请继续关注流式课堂。